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单细胞转录组测序（DNBelab C4）

1.产品介绍

单细胞转录组测序（Single-cell RNA-sequencing，scRNA-seq），是指在单个细胞水平上对转录组进行高通量测序，从而获得单细胞水平的转录图谱的技术，可用于揭示细胞间的异质性和复杂性。为从单细胞水平上了解人的遗传发育、疾病/癌症的发生发展、免疫应答等过程中的表达调控机制提供重要基础。近年来，已有多种单细胞测序技术和平台应运而生,中，DNBelab C4平台是华大智造自主研发的单细胞测序平台，具有细胞捕获率高，适用于较多样本类型，建库测序成本低等优点,为单细胞研究领域带来了革命性的突破。

2.技术原理

DNBelab C-TaiM 4 使用的多磁珠捕获细胞技术可以使有效液滴数量增多，每个有效液滴中包含两类功能磁珠，含有1个及以上Cell Beads（我们称之为大磁珠）、1个细胞、多个Index Carrier（称之为小磁珠）均为有效液滴；两类功能磁珠中，直径较大的磁珠-Cell Beads表面载有千万级条数的长、短两类序列，其中较长的序列在尾部设计有poly T结构，用来捕获细胞裂解后释放的mRNA，较短的序列用于互补配对结合小磁珠上边释放下来的人工设计序列部分；直径较小的磁珠Index Carrier在液滴中数量较多，表面载有千万级条数具有同样序列的标签序列，用来合并液滴中多个大磁珠标记的同一个细胞释放的 mRNA 信息，更准确的识别出液滴中包裹多个磁珠所造成的细胞转录本信息被分割的问题，同时也提高了捕获效率。

3.优势

1. 高通量：DNBelab C4平台支持高达数万个单细胞的并行测序，大大提高了单细胞研究的效率。

2. 高精度：采用先进的微流控技术，确保单细胞的分离和处理过程具有高精度和高重复性，从而提高数据质量。

3. 低样本消耗：DNBelab C4平台对样本的需求量极低，使得珍贵样本的使用更加经济高效。

4. 易用稳定：去掉繁琐的真空破乳和磁珠回收步骤，节省时间。

5. 经济友好：有效数据更多，测序需求成本下降。

6.大小磁珠标记技术：当一个液滴内有一个细胞核多个带标签的大磁珠时，能够通过小磁珠的标签识别出来

4.实验流程

5.分析流程

6.分析结果展示

细胞群体Top10 Marker基因的tsne图

细胞鉴定结果图

气泡图

7.案例解析

文章题目：Rolling back of human pluripotent stem cells to an 8-cell embryo-like stage

中文题目：将人类多能干细胞逆转到8细胞胚胎样阶段

期刊名称：Nature

影响因子：69.504

发表时间：2022.03

实验平台：C4单细胞转录组测序\染色质可及性（scATAC-seq）测序

摘要：研究团队通过系统性的筛选，首次建立了体外全能性8CLC（8细胞期胚胎样细胞）的诱导和富集方法。基于DNBelab C4平台，对8CLC诱导过程的细胞样本进行了单细胞转录组（scRNA-seq）和染色质可及性（scATAC-seq）测序，详细分析了8CLC群体的特征，并在多个诱导时间点描绘了8CLC诱导过程中转录组和染色质开放性的动态变化。研究人员应用单细胞测序技术分析确定了8CLC与人8细胞期胚胎的高度相似性，解析了转化过程的关键分子事件和基因调控网络，并进一步证明产生的8CLC全能性细胞具有在体外或体内以类囊胚和畸胎瘤等形式产生胚胎和胚外谱系的能力。